其他的扫描电子显微镜分析系统都需要对样品进行干燥。干燥方法如下:
·烘箱干燥
·空气自然干燥
·真空干燥
·置换干燥,
·冷冻干燥
·临界点干燥
8 颗粒和纤维
特点为大多数非导电样品,在电镜观察时候,往往静电排斥作用,机械不稳定。所谓样品漂移! 小于1微米的尺度,电子束可能穿透样品,随后基底散射产生的信号,将使得图像反差降低。同时X射线信号会增加基地的成分。
超声波振荡分散:一定量样品放入分散剂中进行分散,分散剂中往往加入表面活性剂。
树脂分散: 把颗粒样品镶嵌在树脂中。
用碳导电胶带,直接沾一些颗粒或者纤维。绝缘的样品喷镀导电膜。
9 生物样品
扫描电子显微镜样品的制备,必须满足以下要求:①保持完好的组织和细胞形态;③充分暴露要观察的部位;③良好的导电性和较高的二次电子产额;④保持充分干燥的状态。
某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图象质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。
化学方法制备样品
化学方法制备样品的程序通常是:清洗、化学固定、干燥、喷镀金属。
1、清洗:某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物,掩盖着要观察的部位,因而,需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。
2、固定:通常采用醛类(主要是戊二醛和多聚甲醛)与四氧化锇双固定,也可用四氧化锇单固定。四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构,而且能增加材料的导电性和二次电子产额,提高扫描电子显微图象的质量。这对高分辨扫描电子显微术是极端重要的。为增强这种效果,可用四氧化锇-单宁酸或是四氧化锇-珠叉二胼等反复处理材料,使其结合更多的重金属锇,这就是导电染色。
3、干燥:固定后通常采用临界点干燥法。其原理是:适当选择温度和压力,使液体达到临界状态(液态和气相间界面消失),从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。对含水生物材料直接进行临界点干燥时,水的临界温度和压力不能过高(37.4℃,218帕)。通常用乙醇或丙酮等使材料脱水,再用一种中间介质,如醋酸戊酯,置换脱水剂,然后在临界点干燥器中用液体或固体二氧化碳、氟利昂13以及一氧化二氮等置换剂置换中间介质,进行临界干燥。